稀释水的质量对 BOD5 测量的准确性具有重要意义。因此，稀释水空白的5天耗氧量必须小于0.2 mg/L，小于0.1 mg/L是比较好的。接种稀释水应在0.3～1.0mg/L之间。

保证稀释水水质的关键是控制有机物含量比较低，抑制微生物繁殖的物质含量比较低。 因此，使用蒸馏水作为稀释水比较好。 用离子交换树脂制成的纯水不适合作为稀释水，因为去离子水往往含有从树脂中分离出来的有机物。

如果用于制备蒸馏水的自来水中含有某些挥发性有机化合物，为了防止它们残留在蒸馏水中，蒸馏前应进行去除有机化合物的预处理。 用金属蒸馏器制成的蒸馏水应注意检查其中金属离子的含量。

如果使用的稀释水因存在有机物而达不到要求，可加入适量曝气池接种物，在室温或20℃下保存一定时间予以消除。接种量以5天耗氧量0.1mg/L为原则。为防止藻类大量繁殖，必须在暗室中进行储存。如果储存后的稀释水中有沉淀物，仅使用上清液过滤除去沉淀。

为保证稀释水中的溶解氧接近饱和，必要时可用真空泵或喷水器吸入净化空气，或用微型空压机注入净化空气， 氧气瓶可用于注入纯氧，然后充氧。将稀释后的水置于20℃培养箱中一定时间，使溶解氧达到平衡。冬季放置在较低室温的稀释水可能含有过多的溶解氧，而在炎热的夏季则相反。因此，当室温与20℃相差较大时，必须在培养箱中放置一段时间，使其与培养环境的氧分压保持平衡。

测定BOD5时如何确定稀释倍数？

稀释倍数过大或过小都可能导致5d耗氧量过小或过多，超过正常耗氧量范围则实验失败。但是，由于BOD5的测量周期较长，一旦出现这种情况，就不能按原样补充。因此，必须高度重视稀释因子的确定。

虽然工业废水成分复杂，但BOD5值与CODCr值之比通常在0.2~0.8之间。造纸、印染、化工等行业的废水比例较低。一些含有颗粒有机物的废水，如酒糟废水等，在测定其BOD5时，会因培养瓶底部的颗粒物沉淀而无法参与生化反应，导致显着下降。较低的比率。

稀释倍数的确定原则是测定BOD5时5d耗氧量应大于2mg/L，剩余溶解氧应大于1mg/L。稀释后第二天培养瓶中的DO为7～8.5mg/L。假设5d耗氧量为4mg/L，稀释因子为CODCr值与0.05、0.1125、0.175 三个的乘积系数。

例如在250mL培养瓶中CODCr为200mg/L时测定BOD5时，三个稀释因子为：①200×0.005=10倍，②200×0.1125=2< @2.5 次，③200×0.175=35 次。如果采用直接稀释法，取水样体积为：①250÷10=25mL，②250÷2<@2.5≈11mL，③250÷35≈7mL。

按照这个采样培养，会有1到2个符合上述两个原则的溶解氧测量结果。如果有两个稀释倍数满足上述原则，计算结果时应取平均值。如果剩余溶解氧小于1mg/L甚至为零，则应增加稀释倍数。如果培养过程中溶解氧消耗量小于2mg/L，可能是稀释倍数过大；另一个可能是微生物菌种不合适，活性差，或者有毒物质浓度太大，此时稀释倍数也可能很大。培养瓶反而消耗更多溶解氧的现象。

若稀释水为接种稀释水，由于空白水样耗氧量0.3～1.0mg/L，稀释系数分别为0.05、0.125 和 0.2。

如果已知水样CODCr的具体数值或近似范围，则根据上述稀释系数更容易分析BOD5值。当水样的 CODCr 范围未知时，为了缩短分析时间，可在 CODCr 测定过程中进行估算。

具体方法是：先配制每升含0.4251g邻苯二甲酸氢钾的标准溶液（此溶液的CODCr值为500mg/L），然后分别稀释至CODCr值为400mg/L和300mg . /L、200mg/L、100mg/L稀溶液。

吸取20.0mL CODCr值为100mg/L～500mg/L的标准溶液，按常规方法加入试剂，测定CODCr值。加热煮沸回流30分钟后，让它冷却至室温并用盖子储存以制成标准的比色系列。在按常规方法测定水样CODCr值的过程中，煮沸回流30分钟后，对比预热后标准CODCr值的色柱，估算水样的CODCr值，然后在测试 BOD5 时确定稀释系数。

对于含有难消化有机物的印染、造纸、化工等工业废水，必要时应在煮沸回流60分钟后进行比色测定。煮沸回流30分钟后，对比预热后标准CODCr值的色柱，估算出水样的CODCr值，再测定BOD5时的稀释倍数。对于含有难消化有机物的印染、造纸、化工等工业废水，必要时应在煮沸回流60分钟后进行比色测定。

煮沸回流30分钟后，对比预热后标准CODCr值的色柱，估算出水样的CODCr值，再测定BOD5时的稀释倍数。对于含有难消化有机物的印染、造纸、化工等工业废水，必要时应在煮沸回流60分钟后进行比色测定。