生活污水与工业废水含有大量有机物，这些有机物在水体中分解时要消耗大量溶解氧，从而破坏水体中氧的平衡，使水质恶化。

生化需氧量是属于利用水中有机物在一定条件下所消耗的氧，用来表示水体中有机物的含量的一个重要指标。

生化需氧量的经典测定方法，是稀释接种法。

稀释接种法：

1、方法原理

生化需氧量是指在一定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质、特别是有机物所进行的生物化学过程消耗溶解氧的量。

于恒温培养箱内在20℃±1℃培养5天，分别测定样品培养前后的溶解氧，二者之差即为BOD5值，以氧的mg/L表示。

本方法适用于测定BOD5范围：2mg/L＜C BOD5＜6000mg/L，当＞6000时，会因稀释带来误差。

仪器：

（1）恒温培养箱

（2）5—20L细口玻璃瓶

（3）1000—2000ml量筒

（4）玻璃棒：50ml，棒的底端固定一个10号的带有几个小孔的橡胶塞。

（5）溶解氧瓶（碘量瓶）：250—300ml

试剂：

（1）磷酸盐缓冲溶液

将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4），21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4），33.4g七水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O），和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀至1000ml。此溶液PH值为7.2。

（2）硫酸镁溶液

将22.5g七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀至1000ml。

（3）氯化钙溶液

将27.5g无水氯化钙溶于水中，稀至1000ml。

（4）氯化铁溶液

将0.25g六水合氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于水，稀至1000ml。

（5）盐酸溶液（0.5mol/L）

将40ml浓盐酸溶于水， 稀至1000ml。

（6）氢氧化钠溶液（0.5mol/L）

将20g氢氧化钠溶于水，稀至1000ml。

（7）葡萄糖—谷氨酸标准溶液

将葡萄糖和谷氨酸在103干燥1小时后，各称取150mg溶于水中，移入1000ml容量瓶中稀至标线，临用前配制。

（8）稀释水

在5—20L玻璃瓶中装入一定量的水，控制水温在20℃左右，用曝气机曝气2-8小时，使稀释水中的溶解氧接近饱和。瓶口盖以两层纱布，置于20℃培养箱内放置数小时，使水中溶解氧含量达到8mg/L左右。临用前向每升水中加入氯化钙、硫酸镁、氯化铁、磷酸缓冲液各1ml，混匀。

（9）接种液可选用以下几种：

①一般生活用水，放置一昼夜，取上清液。

②表层土壤水，取100g花园或植物生长土壤，加1升水，静置10分钟，取上清液。

③污水厂出水

④含有城市污水的河水或湖水

（10）接种稀释水

每升稀释水中接种的加入量：生活污水1-10ml；表层土壤水20-30ml；河水或湖水10-100ml。

接种稀释水pH值为7.2，配制后应立即使用。

2、水样的测定

（1）不经稀释的水样的测定

①将混匀水样转移入两个溶解氧瓶中（转移中不要出现气泡），溢出少许，加塞。瓶内不应留气泡。

②其中一瓶随即测定溶解氧，另一瓶口水封后放入培养箱，在20±1℃下培养5天。

③5天后，测定溶解氧。

④计算：

-水样在培养前的溶解氧浓度

-水样在培养后的溶解氧浓度

经稀释水样的测定：

一般稀释法

①按选定的稀释比例，在1000ml量筒内引入部分稀释水；

②加入需要量的混匀水样，再引入稀释水（或接种稀释水）至800ml；

③用带胶板的玻璃棒上下搅匀。搅拌时胶板不要露出水面，防止产生气泡；

④将水样装入两个溶解氧瓶内，测定当天溶解氧和培养5天后的溶解氧。

⑤稀释水同样培养作空白实验，测定5天前后的溶解氧。

注意事项：

（1）水样pH值应在6.5-7.5范围内，若超出可用盐酸或氢氧化钠调节pH近于7。

（2）水样在采集和保存及操作过程中不要出现气泡

（3）水样稀释倍数超过100时，要预先在容量瓶中用蒸馏水稀释，再取适量进行稀释培养。

（4）检查稀释水和接种液的质量和化验人员的水平，可将20ml葡萄糖-谷氨酸标液用稀释水稀至1000ml，按BOD的步骤操作，测得的值应在180-230mg/L之间，否则，应找出原因所在。

（5）在培养过程中注意及时添加封口水。